С появлением в 2005 году платформ для секвенирования следующего поколения компаний Illumina®, Roche 454™ и Life Technologies (SOLiD™, Ion Torrent™) мир секвенирования нуклеиновых кислот резко изменился.
Основным этапом в пробоподготовке стало создание библиотек нуклеиновых кислот, основанное на серии стандартных молекулярно-биологических реакций, в числе которых реакция «зачистки» концов, лигирование, ПЦР.
Широкое признание технологий NGS в мире привело к быстрому расширению числа их применений в анализе ДНК и РНК, а увеличение производительности секвенаторов создало потребность в надежных, недорогих и экономящих время исследователей техниках пробоподготовки.
Компания NEB разработала серию реактивов NEBNext - наборы ферментов, нуклеотидов и буферов - с учетом технологий секвенирования мировых лидеров в области NGS, Illumina, 454, SOLiD и Ion Torrent, совместимые с платформами этих производителей. Прилагаемые к ним протоколы делают процесс пробоподготовки эффективным, недорогим и надежным.
Все реактивы серии NEBNext проходят валидацию путем приготовления библиотек и их последующего секвенирования на соответствующих платформах NGS, что подтверждено соответствующими валидационными письмами.
Реактивы NEBNext доступны в разных комбинациях, что увеличивает гибкость планирования экспериментов и экономию средств:
На данный момент серия NEBNext представлена:
NEB предлагает также уникальный фермент NEBNext® дцДНК Fragmentase® , заменяющий соникаторы и небулизаторы. Фрагментация матрицы с помощью дцДНК Fragmentase позволяет получать фрагменты ДНК размером от 100 до 800 п.н. в зависимости от времени проведения реакции с более высоким практическим выходом нежели при использовании механической фрагментации с применением соникаторов и небулизаторов.
На рисунке показано распределение относительного размера фрагментов ДНК E.coli, полученных обработкой образца ДНК дцДНК Fragmentase (синяя кривая) и пневматическим небулизатором (зеленая кривая), визуализированное с помощью анализатора Bioanalyzer 2100.
Образец, обрабатываемый дцДНК Fragmentase, инкубировали в течение 30 минут при 37°C в 1X буфере для фрагментазы с БСА (100 мкг/мкл) при соотношении 0.05 мкг ДНК на 1 мкл дцДНК Fragmentase. Образец, фрагментированный с помощью небулизатора, был подвергнут распылению в 50% глицерине в течение 6 минут при давлении 35 psi.
Присоединяйтесь к нам в Telegram!
Вебинары
Новости
Oxford Nanopore Technologies объявили о сотрудничестве с 10x Genomics
Мы в соцсетях