Обновление линейки эндонуклеаз рестрикции

Почти 40 лет назад компания New England Biolabs первая в мире поставила производство ферментов рестрикции на коммерческую основу и с тех пор не сдает лидерских позиций, постоянно совершенствуя свою продукцию. Так и в начале 2013 года компания внедрила целый ряд нововведений, касающихся эндонуклеаз рестрикции.

Во-первых, произошли изменения состава буферных систем, которые применяются совместно с эндонуклеазами рестрикции.

В состав всех буферов теперь входит бычий сывороточный альбумин (БСА), который стабилизирует некоторые ферменты рестрикции и предотвращает их адгезию на поверхности реакционных пробирок и наконечников дозаторов.

Вследствие этого БСА теперь не входит в комплекты поставки ферментов в отдельных пробирках, и нет нужды добавлять его в реакционную смесь. Это сокращает время, необходимое для постановки реакций. При необходимости БСА можно приобрести отдельно. В 2013 году компания NEB начала выпускать улучшенную версию БСА – БСА высокой степени очистки.

Из состава буферов был изъят ДТТ. Многочисленные исследования показали, что наличие ДТТ в составе реакционной смеси не влияет на активность рестриктаз.

Вследствие изменения состава произошла также смена наименований буферов. Теперь буферая система состоит из: NEB-буфера 1.1, NEB-буфера 2.1, NEB-буфера 3.1 и NEB-буфера CutSmart.

Изменение состава буферов позволило увеличить число ферментов (>200), которые наиболее активны в одном буфере - буфере CutSmart. Это очень удобно при проведении реакции двойной рестрикции. Необходимо отметить, что многие ферменты, модифицирующие ДНК и используемые в клонировании, также активны в буфере CutSmart.

Цветовая кодировка буферов сохранилась. В случае необходимости старые буферы можно приобрести отдельно – они остаются в продаже.

Во-вторых, для многих ферментов концентрация увеличена до 10 000 е.а./мл. Увеличение концентрации фермента приводит к уменьшению в реакционной смеси концентрации глицерина, который может влиять на активность рестриктазы.

Увеличилось количество поставки (в е.а.) для рестриктаз SapI, EciI, BceAI, CviAII, BmrI.

В-третьих, произошло ужесточение требований к понятию «Time-Saver рестриктаза». Если раньше Time-Saver рестриктазами назывались все те ферменты, которые расщепляли субстратную ДНК в течение 5-15 минут при соблюдении рекомендуемых условий реакции, то теперь добавилось еще одно условие - фермент не должен проявлять неспецифическую активность при длительной инкубации.

В связи с этим количество Time-Saver рестриктаз, поставляемых компанией NEB, немного сократилось (>180), но NEB не прекращает генно-инженерные работы по разработке ферментов со сниженной неспецифической активностью.

В-четвертых, была модернизирована карточка продукта, вкладываемая в каждый комплект поставки. Теперь она содержит только ту информацию, которая необходима для постановки реакции рестрикции.

С дополнительной информацией, включая спецификацию и сертификат качества, вы можете ознакомиться, просканировав представленный на карточке QR-код или посетив соответствующую Web-страницу на сайте компании NEB.

Наконец, было произведено обновление онлайн-программы Double Digest Finder с учетом выше перечисленных изменений.