Нуклеаза GenCRISPR™ SaCas9 2NLS

Нуклеаза GenCRISPR™ SaCas9 2NLS представляет собой нуклеазу без tag-метки, продуцируемую путем экспрессии в штамме E. coli, несущем плазмиду, кодирующую ген Cas9 из Staphylococcus aureus, с сигналом ядерной локализации на N-конце, и на С-конце. Небольшой размер нуклеазы облегчает доставку in vivo для редактирования генома в различных организмах. 

Нуклеаза GenCRISPR™ SaCas9 2NLS 2 может формировать комплекс с гидовой РНК, образуя рибонуклеопротеин (RNP). Было показано, что использование комплекса RNP для редактирования генов эффективнее других методов геномного редактирования CRISPR, таких как доставка вирусов и плазмид. Снижаются нецелевые эффекты, устраняются проблемы с транскрипцией/трансляцией. SaCas9 распознает мотив, прилегающий к протоспейсеру NNGRRT (PAM), и высокоэффективно расщепляет ДНК-мишень с помощью различных длин спейсера направляющей РНК (гРНК).

Эффективность расщепления плазмиды выше 90%, как показывает анализ в агарозном геле. В реакции объемом 20 мкл использовали 1Х буфер для нуклеазы SaCas9, линеаризованную плазмиду, гРНК и SaCas9, инкубировали в течение 2 часов при 37°C.

Преимущества

• Высокая эффективность нокаута: неизменно высокая эффективность редактирования in vitro. 
• Без tag-меток: не содержит дополнительных аминокислот. 
• Без ДНК: используя рибонуклеопротеиновый (RNP) комплекс вы избегаете добавления «излишней» ДНК в реакцию.

Свойства