Реактивы и оборудование
для лабораторий
0

#25 Сайт-направленный мутагенез с использованием ДНК-полимеразы Q5

05.08.2015

Сайт-направленный мутагенез с использованием ДНК-полимеразы Q5 от New England Biolabs

Сайт-направленный мутагенез - это метод для создания специфических, направленных на определенных участок, изменений в двухцепочечной плазмидной ДНК. Существует множество причин для введения специфических альтераций (вставок, удалений и замен), например:

  • Изучение изменений в активности протеинов, которая происходит в результате манипуляций с ДНК
  • Выбрать или сделать скрининг мутаций (на уровне ДНК, РНК или протеинов) с желаемыми свойствами
  • Ввести или удалить сайты узнавания эндонуклеаз рестрикции или метки
  • Набор Q5® для сайт-направленного мутагенеза позволяет провести, сайт-специфический мутагенез двухцепочечной плазмидной ДНК за 2 часа. Основные этапы процесса представлены на рис.3. Набор использует возможности ДНК-полимеразы Q5 Hot Start совместно с специально подготовленными праймерами - для создания вставок, удаления нуклеотидов или замен в широком спектре различных плазмид. После ПЦР, амплифицированный материал добавляется напрямую к уникальной смеси ферментов Kinase-Ligase-DpnI (KLD) - которая имеет в своем составе киназу, лигазу и рестриктазу Dpnl на 5 минут при комнатной температуре, одновременно происходит также удаление матрицы ДНК. Далее проводится трансформация в высокоэффективные компетентные клетки (например NEB 5-alpha Competent E. coli), которые могут поставляться в составе набора (или в другие клетки имеющиеся в лаборатории), позволяет получить надежные и достоверные результаты для плазмид величиной до 20 000 пар оснований в длину.

    Набор может использоваться для решения следующих задач:

  • Введение единичных мутаций
  • Введение множественных мутации, длиной до 100 п.о.
  • Удаление нуклеотидов
  • Удаление интронов, протеиновых меток, усечение последовательности
  • Вставка сайтов разрезания протеаз
  • Вставка меток для протеинов (HIS, HA, Flag…)
  • Q5 mutagenesis.png

    Рис.3. Принципиальная схема проведения сайт-направленного мутагенеза с использованием Q5 набора для сайт-направленного мутагенеза от New England Biolabs.

    Мы надеемся, что наш обзор позволит вам внедрить новый подход в вашей работе! С вашими вопросами и пожеланиями, обращайтесь, пожалуйста по электронному адресу info@skygen.com

    Обратная связь

    © 2012-2019 SkyGen
    Информация и цены на сайте не являются публичной офертой
    Изготовление сайта – НБС-Медиа
    На нашем веб-сайте мы используем файлы cookie, которые помогают нам создать максимально удобные для посетителя условия пользования сайтом. Если Вы продолжите использовать сайт, мы будем считать что Вас это устраивает. ОK