Сайт-направленный мутагенез с использованием ДНК-полимеразы Q5 от New England Biolabs
Сайт-направленный мутагенез - это метод для создания специфических, направленных на определенных участок, изменений в двухцепочечной плазмидной ДНК. Существует множество причин для введения специфических альтераций (вставок, удалений и замен), например:
Набор Q5® для сайт-направленного мутагенеза позволяет провести, сайт-специфический мутагенез двухцепочечной плазмидной ДНК за 2 часа. Основные этапы процесса представлены на рис.3. Набор использует возможности ДНК-полимеразы Q5 Hot Start совместно с специально подготовленными праймерами - для создания вставок, удаления нуклеотидов или замен в широком спектре различных плазмид. После ПЦР, амплифицированный материал добавляется напрямую к уникальной смеси ферментов Kinase-Ligase-DpnI (KLD) - которая имеет в своем составе киназу, лигазу и рестриктазу Dpnl на 5 минут при комнатной температуре, одновременно происходит также удаление матрицы ДНК. Далее проводится трансформация в высокоэффективные компетентные клетки (например NEB 5-alpha Competent E. coli), которые могут поставляться в составе набора (или в другие клетки имеющиеся в лаборатории), позволяет получить надежные и достоверные результаты для плазмид величиной до 20 000 пар оснований в длину.
Набор может использоваться для решения следующих задач:
Рис.3. Принципиальная схема проведения сайт-направленного мутагенеза с использованием Q5 набора для сайт-направленного мутагенеза от New England Biolabs.
Мы надеемся, что наш обзор позволит вам внедрить новый подход в вашей работе! С вашими вопросами и пожеланиями, обращайтесь, пожалуйста по электронному адресу [email protected]
Присоединяйтесь к нам в Telegram!
Вебинары
Новости
Oxford Nanopore Technologies объявили о сотрудничестве с 10x Genomics
Мы в соцсетях