расходные материалы
для лабораторий
Набор NEBNext® Immune для создания библиотек иммунных профилей генов В и Т-клеток человека
| Артикул | Название товара | Цена* | |
|---|---|---|---|
| E6320 L | Набор NEBNext® Immune для создания библиотек иммунных профилей генов В и Т-клеток человека, 96 реакций | по запросу | |
| E6320 S | Набор NEBNext® Immune для создания библиотек иммунных профилей генов В и Т-клеток человека, 24 реакции | по запросу |
Набор NEBNext® Immune для создания библиотек иммунных профилей генов В и Т-клеток человека предназначен для подготовки библиотек секвенирования на платформе Illumina® для получения полных последовательностей репертуаров иммунных генов B-клеток и Т-клеток человека.
Наборы NEBNext® Immune были разработаны для профилирования соматических мутаций в полноразмерных иммунных репертуарах генов В-клеток и Т-клеток посредством экспрессии цепей антител.
Рис. 1. Упрощенная схема структуры антитела или Т-клеточного рецептора.
В набор входят модульные наборы праймеров для амплификации сегментов V, D и J, что позволяет получить полную информацию об изотипах (IgM, IgD, IgG, IgA и IgE), а также охарактеризовать цепи TCRα и TCRβ.
Баркодирование образцов с помощью UMI (уникальных молекулярных идентификаторов) даёт возможность объединить ПЦР-копии, полученные из каждой исходной молекулы, в согласованную последовательность. Это повышает точность секвенирования и исключает ПЦР-артефакты.
Кроме того, в свободном доступе находится протокол разработанный для биоинформатического анализа данных секвенирования.
Преимущества набора:
- Создание полноразмерных вариабельных последовательностей ДНК (включая информацию об изотипах), позволяющих осуществлять последующий синтез антител и их функциональную характеристику, что невозможно с подходами, секвенирующими только область CDR3.
- Для вариабельных областей не используются праймеры, что снижает сложность общего пула праймеров и обеспечивает независимое и одновременное восстановление транскриптов В и Т-клеточных рецепторов.
- Использование UMI позволяет точно количественно определить содержание каждого клона в образце.
- Высокая эффективность захвата мишени для секвенирования иммунного репертуара и анализа субмикрограммных количеств общей РНК.
Схема протокола работы с набором NEBNext® Immune
В состав набора входят:
| Наименование | Температура хранения | Концентрация |
| NEBNext® IS 4X RT буфер | -20 °C | 4Х |
| NEBNext® буфер для лизиса | -20 °C | - |
| Смесь дезоксинуклеотидов | -20 °C | 10 mM |
| NEBNext® IS RT праймеры | -20 °C | 10 mM |
| NEBNext® IS TS олигонуклеотиды | -20 °C | 30 mM |
| NEBNext® Готовая смесь ферментов для синтеза второй цепи кДНК | -20 °C | - |
| Q5® Hot Start HF ДНК-полимераза | -20 °C | 0.002 ед.а./мл |
| Реакционный буфер для Q5® ДНК-полимеразы | -20 °C | 5Х |
| NEBNext® IS PCR2 универсальные праймеры | -20 °C | 10 mM |
| Буфер TE | -20 °C | 0.1Х |
| Вода без нуклеаз | +4 °C | - |
| Праймеры NEBNext® i701- i712 | -20 °C | 10 µM |
| Праймеры NEBNext® i501- i508 | -20 °C | 10 µM |
| Магнитные шарики с иммобилизованным стрептавидином | +4 °C | - |
| NEBNext® IS 2X связывающий/промывающий буфер | +4 °C | 2X |
| 0.1% Tween | +4 °C | 0.1 % |
| NEBNext® Магнитные шарики для очистки | +25 °C | |
| NEBNext® IS BCR праймеры | -20 °C | 1 µM |
| NEBNext® IS TCR праймеры | -20 °C | 1 µM |
