Амплификация и ПЦР

Понятие «in vitro амплификация» включает в себя методы, позволяющие создать множество копий таргетной последовательности даже из одной молекулы ДНК или мРНК. Такие методы часто применяются, когда необходимо обнаружить определенные гены в последовательности, исследовать специфические области ДНК или точечные мутации.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является самым популярным методом амплификации в молекулярной биологии. New England Biolabs имеет огромный опыт в разработке надежных и удобных инструментов для ПЦР и ОТ-ПЦР. Именно реагенты NEB использовались при проведении первого ПЦР эксперимента в космосе, в рамках программы Genes in Space. В их портфолио, кроме стандартной Taq-полимеразы, вы найдете:

Улучшенную OneTaq-полимеразу для рутинной ПЦР;
Высокоточную Q5-полимеразу для клонирования;
Longamp-полимераза для получения длинных ампликонов (до 30 тыс. п.о.);
А также много продуктов для узкоспециализированных приложений ПЦР (Vent, Epimark, Hemo KlenTaq и др.).

Вы можете приобрести как отдельный фермент, так и набор для проведения ПЦР или готовую смесь, где все необходимые компоненты уже добавлены в нужных концентрациях для упрощения работы и экономии времени.

Помимо ПЦР New England Biolabs предлагает решения и для альтернативных методов амплификации. Для медицины и других диагностических целей, сейчас крайне актуальны методы сиквенс-специфичной изотермической амплификации. Вместо нагревания здесь используются ферменты с хеликазной активностью, например Bst ДНК-полимераза. Чтобы снять некоторые ограничения с существующих способов проведения изотермической амплификации NEB разработали новое поколение Bst 2.0 и Bst 2.0 WarmStart®. Последний фермент позволяет смешивать реагенты при комнатной температуре, не опасаясь преждевременного начала полимеризации, так как полную активность он проявляет только при температурах выше 50°C. А также специалисты NEB создали фермент Bst 3.0, обладающий сильной ревертазной активностью.

Более подробно о ДНК полимеразах от NEB можно узнать в наших обзорах:

#8 Как найти свою ДНК-полимеразу среди многообразия ферментов от New England Biolabs? (Часть 1)

#9 Как найти свою ДНК-полимеразу среди многообразия ферментов от New England Biolabs? (Часть 2)

Онлайн инструменты

Девиз основателей New England Biolabs “By scientists for scientists” / “От исследователей исследователям”. Поэтому на сайте производителя есть множество онлайн инструментов для планирования эксперимента:

	PolBase – хранилище данных о биохимических характеристиках, генетике и строении ДНК полимераз
	PCR selector – поможет подобрать полимеразу подходящую для конкретного эксперимента
	Tm calculator – инструмент позволяет рассчитать оптимальную температура отжига ампликонов, с учетом типа полимеразы, концентрации праймера и его сиквенса.
	PCR fidelity estimator – оцените процент правильных ДНК копий (без ошибочных оснований) созданных за один цикл для выбранной полимеразы