Реактивы и оборудование
для лабораторий

Набор NEBNext Multiplex для создания библиотек малых РНК для Illumina

Описание

Набор NEBNext Multiplex для создания библиотек малых РНК для Illumina (индексные праймеры 1-12) содержит адапторы, праймеры, ферменты и буферы, которые идеальн подходят для превращения малых РНК- транскриптов в баркодированные библиотеки кДНК для секвенирования следующего поколения на платформе Illumina. Каждый из этих компонентов проходит строгие стандарты контроля качества и контроля лотов как индивидуально, так и в составе набора реагентов.

Контроль лота

Все поставляемые лоты наборов NEBNext Multiplex для создания библиотек малых РНК для Illumina проверяются отдельно и проходят дополнительную функциональную валидацию. Отдельные реагенты подвергаются стандартной оценке ферментативной активности и контролю качества и соответствуют строгим дополнительным критериям контроля качества.

Функциональная валидация

Каждый набор реагентов функционально валидирован путем конструирования и секвенирования библиотеки баркодированных малых РНК на платформе Illumina.

Состав набора NEBNext Multiplex для создания библиотек малых РНК для Illumina (индексные праймеры 1-12)

Объемов поставляемых реагентов достаточно для постановки 24 реакций (NEB #E7300S) или 96 реакций (NEB #E7300L). Все реагенты должны храниться при -20°C.

  • Реакционный буфер для лигирования NEBNext 3´ (2X)
  • Смесь ферментов для лигирования NEBNext 3’
  • 3´ SR адаптор NEBNext для Illumina
  • 5´ SR адаптор NEBNext для Illumina
  • Реакционный буфер для лигирования NEBNext 5´ (10X)
  • Смесь ферментов для лигирования NEBNext 5´
  • SR RT праймер для Illumina NEBNext Multiplex
  • Смесь дезоксинуклеотидов (10 мМ каждого дНТФ)
  • Мышиный ингибитор РНКазы
  • Мастер микс LongAmp Taq (2X)
  • SR праймер для Illumina NEBNext Multiplex
  • Индексный праймер 1 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 2 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 3 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 4 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 5 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 6 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 7 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 8 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 9 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 10 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 11 NEBNext для Illumina
  • Индексный праймер 12 NEBNext для Illumina
  • Краситель для внесения образца в гель, синий (6X)
  • Маркер: фрагменты ДНК pBR322, рестрицирванные по сайту MspI
  • Гель для элюции ДНК из геля, 1х
  • Линейный акриламид (10 мг/мл)
  • ТЕ-буфер
  • Свободная от нуклеаз вода

Требующиеся материалы, не входящие в состав набора:

  • 3М ацетат натрия, рН 5.5
  • 100% этанол
  • 80% этанол
  • Обратная транскриптаза SuperScript® III (Life Technologies, #18080-044)
  • 5х буфер для синтеза первой цепи (поставляется вместе с обратной транскриптазой SuperScript® III)
  • 0.1 М DTT (поставляется вместе с обратной транскриптазой SuperScript® III)
  • Центрифужные пробирки с фильтрами Corning®, Costar®, Spin-X® Фильтры для центрифужных пробирок (фильтры из ацетатцеллюлозы) (Sigma Aldrich # CLS8162)
  • Свободные от РНКазы одноразовые пестики (Kimble Kontes Asset Management, Inc. #749521-1590)
  • 6% Novex® TBE-гель для PAGE, 1.0 мм, 10 лунок (Life Technologies, Inc. #EC6265BOX)
  • Краситель для внесения в гель нуклеиновых кислот SYBR® Gold (Life Technologies, Inc. S-11494)
  • QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen #28104)
  • Баня с сухим льдом/метанолом или холодильник с температурой -80°C
  • Анализатор Bioanalyzer® (Agilent Technologies, Inc.)
E7300a_v1.jpg

Рис. 1. Типичные результаты библиотеки тотальной РНК мозга человека (А) и семенников крысы (В) перед разделением размеров.

Полосы длиной 143 и 145 п.о. соответствуют miРНК и piРНК. Полосы на электрофореграммах Биоанализатора по размеру на 6-8 нуклеотидов больше, чем размер, наблюдаемый на ПААГ- геле и могут сдвигаться от образца к образцу из-за некорректной идентификации маркера программным обеспечением биоанализатора. Пик miРНК должен находиться на отметке 143- 146 п.о.

E7300b_v1.jpg

Рис. 2.Типичный вид библиотеки тотальной РНК мозга человека (А) и семенников крысы (В). Полосы на уровне 140 и 150 п.о. соответствуют miРНК (21- ая) и piРНК (30-я).

E7300c_v1.jpg

Рис. 3. Электрофореграмма определенной очищенной библиотеки тотальной РНК иозга человека.

Температура хранения:-20°C

Артикул Название товара Цена
E7645 S Набор для подготовки геномных библиотек NEBNext® Ultra II для секвенир. на платформе Illumina®, 24 р
43585 р.
E7580 L Набор NEBNext® Multiplex для создания библиотек малых РНК для платформы Illumina®, с комплектом инде
   Кол-во:96 реакций  
407176 р.
E7580 S Набор NEBNext® Multiplex для создания библиотек малых РНК для платформы Illumina®, с комплектом инде
   Кол-во:24 реакции  
119758 р.
E7300 G Набор NEBNext® Multiplex для создания библиотек малых РНК для Illumina® (набор №1)
Концентрация:-    Кол-во:6 реакций  
E7300 L Набор NEBNext® Multiplex для создания библиотек малых РНК для платформы Illumina® с комплектом прайм
Концентрация:-    Кол-во:96 реакций  
407176 р.
E7300 S Набор NEBNext® Multiplex для создания библиотек малых РНК для платформы Illumina® с комплектом прайм
Концентрация:-    Кол-во:24 реакции  
119758 р.

Назад к странице «Реактивы для пробоподготовки (Illumina®)»