Реактивы и оборудование
для лабораторий

Маркер микроРНК

Артикул Название товара Цена
N2102 S Маркер микроРНК
Концентрация:12 нг/мкл    Кол-во:100 реакций  
5535 р.

Маркер представляет собой смесь трех синтетических одноцепочечных РНК-олигонуклеотидов длиной 17, 21 и 25 нуклеотидов, 5’-конец которых нефосфорилирован:
25-mer: 5´-AGAGCAGUGGCUGGUUGAGAUUUAA-3´
21-mer: 5´-AGCAGUGGCUGGUUGAGAUUU-3´
17-mer: 5´-CAGUGGCUGGUUGAGAU-3´

Эти олигонуклеотиды могут использоваться для определения длины исследуемых фрагментов РНК в денатурирующем ПААГ и на нозерн-блоте. При окраске SYBR Gold маркер визуализируется лучше, чем при окраске этидиум бромидом.

Все три олигонуклеотида содержат одинаковую коровую последовательность длиной 17 нуклеотидов (выделенную жирным шрифтом), что позволяет детектировать их путем гибридизации с одной и той же пробой.

Вместе с маркером поставляется ДНК-олигонуклеотидная проба длиной 21 нуклеотид с последовательностью 5´-AAATCTCAACCAGCCACTGCT-3´-биотин. 3’-конец пробы биотинилирован, а 5’-конец – нефосфорилирован, что позволяет метить ее при помощи γ-32P-АТФ и Т4 полинуклеотидкиназы.

Справа представлена электрофореграмма разделения маркеров при помощи электрофореза в 12% денатурирующем ПААГ с мочевиной: Дорожка А - 60 нг маркера микроРНК (5 мкл), Дорожка В - 0.2 мкг маркера малых длин оцРНК (N0364). По окончании электрофореза гель окрашивали SYBR Gold (Molecular Probes) в течение 5 минут и фотографировали в УФ-свете трансиллюминатора.

В состав набора также входит:
Проба (21-mer), 10 мкг

Температура хранения: -20°С

Химический состав

Маркер: раствор синтетических РНК-олигонуклеотидов длиной 25, 21 и 17 нуклеотидов
в буфере, содержащем:
4 M мочевину и 0.04 % Orange G.

Проба: водный раствор синтетического ДНК-олигонуклеотида длиной 21 нуклеотдид.

Концентрация:
Маркер: 12 нг/мкл
Проба: 20 нг/мкл

Рекомендуемый объем нанесения:
от 5 мкл для визуализации на геле, окрашенном SYBR Gold,
от 1 мкл для визуализации на нозерн-блоте.

Подготовка маркера:
Маркер поставляется в готовом для нанесения денатурирующем растворе. Денатурируйте маркер путем нагревания в течение 3-5 минут при температуре 95°С и резко опустите в лед. Нанесите маркер на гель.

Примечания:

  1. Краситель Orange G движется в геле быстрее, чем самый короткий олигонуклеотид.
  2. При гибридизации используйте 1-10 мкл пробы на 10 мл раствора для гибридизации.
  3. При мечении пробы γ-32P-АТФ рекомендуется следовать следующему протоколу.
    Смешайте следующие компоненты в микроцентрифужной пробирке:
    Проба – 1-5 мкл,
    10Х буфер для Т4 полинуклеотидкиназы – 2 мкл,
    γ-32P-АТФ (5 мкКи/мкл) – 1-2 мкл,
    Т4 полинуклеотидкиназа – 1 мкл,
    Стерильная вода – до 20 мкл.
    Инкубируйте в течение 30 мин при 37°С. Очистите меченую пробу на колонке с сефадексом G-25.

Обычно с этим товаром покупают

Артикул Название товара Цена
M0201 L T4 полинуклеотидкиназа
Концентрация:10 000 е.а./мл    Кол-во:2 500 е.а.  
M0201 V T4 полинуклеотидкиназа
Концентрация:10 000 е.а./мл    Кол-во:200 е.а.  
M0201 S T4 полинуклеотидкиназа
Концентрация:10 000 е.а./мл    Кол-во:500 е.а.  

Назад к странице «Маркеры длин РНК»